大戟脂中三萜类化学成分的研究（一）

大戟脂为大戟科Euphorbiaceae大戟属Euphorbia植物多脂大戟E. resinifera Berger的大戟的研树脂状分泌物，原产欧洲，脂中非洲也有分布。萜类大戟脂具有强筋健骨、化学散寒止痛、成分燥湿退肿、大戟的研通利肠阻、脂中除白内障等功效。萜类大戟脂中含有二萜、化学三萜、成分倍半萜等化学成分，大戟的研其特征性成分为二萜和三萜类成分。脂中现今关于大戟脂的萜类化学成分研究报道较少，人们对其的化学开发与研究还具有很大的潜力。在本课题以前的成分工作中，从大戟脂中分离得到了包括二萜类、三萜类、甾体类、酯类等类型的化合物。本文继续报道从中分离得到的7个三萜类成分。

1 材料

1.1仪器

Unity-Inova400型和600型超导核磁共振谱仪（美国Varian公司）；Micromass Autspec-Ultima ETOF型质谱仪（美国Waters公司）；旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；循环水式多用真空泵（上海亚荣生化仪器厂）；AL204型电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；LC3000型高效液相色谱仪（北京创新通恒科技有限公司）；制备型色谱柱为：Positisil C8（10 mm×250mm, 5 μm）。

1.2试剂

HSGF254硅胶（烟台市化学工业研究所，批号20170405）；柱色谱硅胶（青岛海洋化工厂，批号20170502）；聚酰胺（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）；氘代试剂（侨仪生物科技有限公司，批号20180311）；茴香醛（天津市光复精细化工研究所，批号20171205）；柱色谱试剂均为分析纯（北京化工厂）；HPLC所用试剂均为色谱纯 (百灵威化学技术有限公司)。

1.3 药材

大戟脂药材2018年8月购自新疆济人药业有限公司，经新疆药物研究所何江副研究员鉴定为大戟科植物多脂大戟E. resinifera的树脂状分泌物。

2 提取分离

取大戟脂药材500g粉碎，10倍量的95％乙醇加热回流提取3次，每次2h，过滤，合并滤液，减压回收溶剂得浸膏（266 g）。浸膏以硅胶拌样后上硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯（1:0～0:1）梯度洗脱，得到24个流分。第12流份(42g)经过聚酰胺柱色谱，以（40%～95%乙醇）梯度洗脱，得到10个流分（Fr. 1'～Fr. 10'），Fr. 6'～Fr. 7'合并共33 g经过硅胶柱分离，依次用石油醚-乙酸乙酯（1:0～0:1），95%乙醇梯度洗脱，得到24个流分（Fr. 1～Fr. 24）。

其中Fr. 8经过制备型高效液相（乙腈-水80:20, 3.0 mL·min-1）得到化合物3（15.2mg, tR＝79 min）；Fr. 9经过制备型高效液相（乙腈-水72:28, 3.0 mL·min-1）得到化合物4（3.3mg, tR＝37.6 min）；Fr. 11经过制备型高效液相（乙腈-水70:30, 3.0 mL·min-1）及制备薄层（硅胶板，展开剂:二氯甲烷-甲醇30:1）得到化合物5（7mg）；Fr. 14经过反相C8柱和硅胶柱层析得到化合物6（3.8mg）；Fr.15~17经ODS中压柱色谱分离，以甲醇为洗脱溶剂，用甲醇（70%～100%）梯度洗脱，得到12个流分（Fr. a～Fr. l)。Fr. j进一步反复硅胶H柱色谱，以石油醚-二氯甲烷（2:1）洗脱，得化合物1（10 mg）、化合物2（8.0 mg）。Fr. 18经过ODS反相柱，制备型高效液相（乙腈-水65:35，3.0 mL·min-1）得到化合物7（8.6mg, tR＝96.7 min）。

3 结构鉴定

化合物1白色胶状固体，易溶于氯仿、丙酮。熔点mp 118℃，=+25°(c=1，MeOH)。UV (MeOH) λmax (logε)：203 (0.338) nm；IR νmax：3428, 2957, 2872, 1709, 1466, 1374, 1293cm-1；HR-ESI-MS m/z 423.36139+（计算值423.36214），提示其分子式为C30H47O，不饱和度为7。

在1H-NMR数据表明了三萜的特征，7个甲基氢信号，分别为6个季碳甲基信号和1个仲碳甲基信号。在13C-NMR显示了三萜的30个碳信号，包括7个甲基碳信号(δC：16.82, 17.65, 18.32, 18.401, 9.13, 21.44, 25.74)、9个亚甲碳信号(δC：36.31, 34.49, 32.32, 27.87, 27.87, 24.89, 23.45, 29.20, 19.52)、7个次甲基信号(δC：51.95, 44.2, 43.73, 35.89；δC：154.06, 126.67, 125.12为烯碳)、7个季碳信号(δC：131.01, 49.21, 45.97, 45.33, 29.88, 24.79；δC：205.34为羰基碳)。化合物1的四环三萜碳骨架与cycloartan-1,24-diene-3,23-dione相似，C-17位侧链与cycloartan-24-ene-1R,2R,3R-triol相似。并借助2D NMR图谱综合解析对其结构进行一步确证。

通过1H-1H COSY和HSQC图谱解析，对化合物1的NMR谱中氢及其直接相连的碳信号进行了准确归属。在化合物1的1H-1H COSY谱中，根据H-1/H-2相关，H-5/H2-6/H-7/H-8依次相关，H2-11/H2-12依次相关，H2-15/H2-16/H-17依次相关，H-20/H3-21、H2-22/H2-23/H-24依次相关确定了该化合物结构中氢之间存在邻位偶合关系的结构片段。化合物1的HMBC谱给出氢与碳的远程相关信号，即H1-1、H3-28和H3-29同时与C-3相关，H2-19与C-1、H1-2与C-10相关性表明存在A环。H2-19与C-5、C-8、C-9、C-10相关和H1-1与C-9和H2-6与C-4的跨环相关性建立了9, 19-环丙基环和环B的关键部分。同样，环C和D的结构以及21、23侧链是由远程相关性建立的，H3-18与C-12、C-13、C-14和C-17相关，H3-30与C-8、C-13、C-14和C-15相关性证明了C环和D环的存在以及H3-21与C-17和C-22相关性表明了位于C-17上的CH-20～CH2-23结构单元的存在。综合以上信息，确定化合物1的平面结构为cycloartan-1,24-diene-3-one。在ROESY谱中显示H-5/H3-29、H-5/H-7α、H-7α/H3-30、H-8/H3-18、H-8/H-19β、H-19β/H3-28相关，证明 H-5、CH3-29、CH3-30为α构型，H-8、CH3-18、CH3-28为β构型。

化合物2白色胶状固体，易溶于氯仿、丙酮等溶剂。熔点mp 83 ℃，=-17°(c=1，MeOH)。UV (MeOH) λmax (logε)：202 (0.341) , 269(0.254) nm；IR νmax：3 041, 2958, 2867, 2 833, 1 670, 1 644, 1 460, 1377, 1 157 cm-1；HR-ESI-MS m/z425.3778+(计算值425.37779)，分子式为C30H49O，不饱和度为6。

比较化合物2和1的1H-NMR和13C-NMR数据，化合物2与同时分离得到的化合物1的数据十分相似，主要区别是化合物2的NMR谱显示有一组特征共振信号，是这2种化合物的唯一区别，化合物1中的C-3位连接的是羰基，而化合物2中的C-3上连接的是羟基，这是由1H-NMRδH:3.98(t,J=1.9Hz,H-3)，13C-NMRδc:133.49(C-1),128.89(C-2),77.13(C-3),38.35(C-4),29.09(C-9),22.62(C-10),26.56(C-19), 14.24(C-28), 24.68(C-29)确定的。

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